反相色譜法是以被測(cè)的高分子為固定相、以惰性氣體為流動(dòng)相，為了測(cè)定需要，在流動(dòng)相中加入一些探針?lè)肿樱鼈兪菗]發(fā)性的低分子。
反相色譜法的作用
近十年來(lái)，高效液相色譜在蛋白質(zhì)分離純化方面取得了很大的進(jìn)展，并得到了廣泛的應(yīng)用。HPLC包括排阻色譜、離子交換色譜、親和色譜以及反相色譜等，幾乎已在蛋白質(zhì)分離中得到應(yīng)用。這些方法在蛋白質(zhì)分離中各有其地位，但到目前為止人們普遍認(rèn)為反相高效液相色譜是分離純化蛋白質(zhì)的最有效的方法之一。
反相色譜法的影響因素
1、溶質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)（極性）
極性越弱，疏水性越強(qiáng)，k越大，tR也越大。同系物碳數(shù)越多，極性越弱，k越大；引入極性取代基，降低疏水性，k值變小。
2、固定相
鍵合烷基的疏水性隨碳鏈的延長(zhǎng)而增加，溶質(zhì)的k也增大。硅膠表面鍵合烷基的濃度越大，則溶質(zhì)的k越大。
3、流動(dòng)相
極性越強(qiáng)，洗脫能力越弱，使溶質(zhì)的k越大；溶劑種類：水為弱溶劑，醇為強(qiáng)溶劑；溶劑比例：水的比例增加，使k增大。
化學(xué)慧定制合成事業(yè)部摘錄
