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紅蔥Eleutherine americana Merr. et K. Heyne，多年生草本，為鳶尾科（Iridacea）紅蔥屬Eleutherine Herb. 植物，非《中國藥典》收載用藥，但為南方少數民族如傣族、彝族、德昂族、黎族等常用中草藥，藥用部位為全草、鱗莖。該藥性苦，味涼，具有清熱解毒、散瘀消腫、止血之功效，民間常用于治療心悸、頭暈、跌打腫痛、吐血、咯血等癥^[1-3]。藥理活性篩選表明紅蔥提取物具有多方面的藥理活性，包括抗細菌、抗真菌、擴張動脈血管、抗炎、抗氧化、抗腫瘤等^[4-7]。化學成分研究方面，已有學者從紅蔥中分離得到不同結構類型的化合物，如萘酚類、萘醌類、糖苷類、甾體類等，其中萘酚和醌類含量最為豐富^[8-10]。課題組前期從紅蔥鱗莖中分離得到了一系列化合物并進行了血管舒張作用篩選，本研究進一步從紅蔥全草中得到了4個醌類化合物紅蔥醌A（ameriquinoneA，1）、elecanacin（2）、3- [2-(acetyloxy)propyl]-2-hydroxy-8-methoxy-1,4-naphtha-quinone（3）、2-acetyl-1,8-dimethoxy-3-methylna-phthalene（4）和1個萘類化合物二羥基艾榴醇（dihydroeleutherinol，5），其中化合物1為首次報道的新萘醌類化合物。針對紅蔥提取物的藥理活性報道，對所得5個化合物進行了抗菌活性篩選，結果表明，化合物1～5均有不同程度抑制金黃色葡萄球菌和大腸桿菌生長的作用，其中化合物5對2種菌的最小抑菌濃度（MIC）分別為0.30、0.06 μg/mL。

1? 儀器與材料

Bruker Avance III600型核磁共振波譜儀，德國Bruker公司；創新通恒LC-3000高效液相色譜儀（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，體積流量2 mL/min）、RE-2000B型旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；柱色譜硅膠、薄層色譜用硅膠GF₂₅₄（青島海洋化工有限公司），常規試劑均為分析純，娃哈哈水。

紅蔥全草于2016年11月采于廣西河池市，經中國醫學科學院藥用植物研究所海南分所李榕濤副研究員鑒定為紅蔥Eleutherine americana Merr. et K. Heyne。

2? 提取與分離

干燥紅蔥全草粉末5.0 kg，甲醇冷浸3次，每次24 h，合并冷浸液，殘渣用甲醇回流提取2次，每次2 h，合并冷浸和回流提取液，減壓回收溶劑，濃縮后得總浸膏812 g。總浸膏用水分散后，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇洗脫，洗脫液減壓濃縮。最終得到石油醚部位浸膏60.8 g、氯仿部位325.1 g、醋酸乙酯部位84.4 g、正丁醇部位138.3 g。取石油醚層浸膏60.8 g經硅膠柱色譜分離，用石油醚-二氯甲烷溶劑系統進行梯度洗脫（1∶0、100∶1、80∶1、60∶1、40∶1、30∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1、0∶1）。其中，石油醚-二氯甲烷40∶1洗脫部分經硅膠柱色譜（300～400目）梯度洗脫得到４個組分Fr. 1～4。Fr. 1經石油醚-二氯甲烷（100∶1、80∶1、60∶1、40∶1）梯度洗脫，TLC薄層檢識合并相同組分得到化合物3（2.7 mg）；Fr. 2經石油醚-二氯甲烷（80∶1、60∶1、50∶1）梯度洗脫，TLC薄層檢識合并相同組分得到化合物2（21.3 mg）；Fr. 3經石油醚-二氯甲烷（50∶1、40∶1、30∶1）梯度洗脫，TLC薄層檢識合并相同組分得到化合物4（8.3 mg）。氯仿層浸膏325.1 g經硅膠柱色譜分離，石油醚-醋酸乙酯溶劑系統進行梯度洗脫（80∶1、60∶1、50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、8∶1、4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4、0∶1）。其中，石油醚-醋酸乙酯30∶1洗脫部分經硅膠柱色譜（300～400目）梯度洗脫（石油醚-醋酸乙酯40∶1、30∶1、20∶1），TLC薄層檢識合并相同組分得到化合物1（2.2 mg），混合組分進一步進行高效液相色譜分離純化得到化合物5（1.4 mg，t_R＝22.9 min，甲醇-水82∶18）。

3? 結構鑒定

化合物1：黃色粉末（甲醇）。[α]20D +65.4° (c 0.10, MeOH)；HR-ESI-MS m/z: 369.091 8 [M＋Na]⁺（計算值369.095 0，C₁₆H₁₆O₄Na），確定分子式為C₁₆H₁₆O₄，不飽和度為9。¹H-NMR譜（表1）給出3個相互偶合的芳環質子δ_H 7.16 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.38 (1H, d, J= 8.4 Hz), 7.50 (1H, t, J = 8.4 Hz)，提示結構中存在1,2,3,-三取代的芳環ABM偶合系統；δ_H4.86 (1H, q, J = 6.6 Hz) 和1.24 (3H, d, J = 6.6 Hz) 提示結構中存在 -CH(CH₃)-O– 結構單元；甲基質子δ_H1.97 (3H, s) 表明結構中存在乙酰基取代；甲氧基δ_H 3.66 (3H, s) 提示結構中存在羧甲基官能團。¹³C-APT譜（表1）共給出16個碳信號，其中δ_C 184.6, 182.7, 156.9, 141.1, 136.7,136.0, 131.9, 117.2, 116.8, 115.2為萘醌結構單元碳信號^[6-7]；δ_C 67.9, 21.0為-CH (CH₃)-O-片段碳信號；δ_C 170.4, 21.2為乙酰基碳信號；δ_C172.2, 53.0為羧甲基碳信號；上述片段與氫譜信號推斷完全一致。HMBC譜顯示（圖1），δ_H7.38 (H-5) 和2.01 (H-3′a) 均與δ_C184.6存在遠程相關，提示C-4位的化學位移為δ_C184.6；另外δ_H 1.24 (2′-CH₃) 與δ_C 67.9 (C-1′) 和δ_C136.7 (C-2) 存在遠程相關，且δ_H 4.86 (H-1′) 與δ_C 182.7 (C-1) 和136.7 (C-2) 存在遠程相關，提示C-1和C-2位的化學位移分別為δ_C 182.7和136.7；另外，連氧質子δ_H 4.86與δ_C 170.4 (-OCO) 存在遠程HMBC相關，提示乙酰基與-CH (CH₃)-O-片段相連，且-CH (CH₃)-O-取代在萘醌的C-2位上；δ_H2.01 (1H, d, J = 15.0 Hz, H-3′a),2.26 (1H, d, J = 15.0 Hz, H-3′b) 與δ_C141.1 (C-3) 和δ_C 172.2 (-CO) 存在遠程HMBC相關，表明羧甲基與-CH₂-相連，該片段取代在苯醌的C-3位上。進一步分析HMBC發現，δ_H3.91 (-OCH₃)、7.50 (H-6) 均與δ_C 156.9 (C-8) 存在遠程相關，提示C-8位存在甲氧基取代。C-1′位的絕對構型通過CD譜確定。在CD譜中，由于苯醌的π–π和n–π電子躍遷效應，化合物1在290 nm (Δε?1.2) 和255 nm (Δε +2.0) 處出現Cotton效應，提示化合物1的C-1′為R構型^[11]。綜上所述，化合物1的結構確定如圖1所示，為1個新穎醌類化合物，命名為紅蔥醌A。

化合物2：黃色粉末（甲醇）。ESI-MS m/z:295 [M＋Na]⁺。¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 7.67 (1H, d, J = 7.8Hz, H-5), 7.72 (1H, t, J = 7.8 Hz, H-6),7.29 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-7), 4.61 (1H,dd, J = 6.6, 3.6 Hz, H-2′), 4.55 (1H,m, H-3′), 1.46 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-5′),3.97 (3H, s, 8-OCH₃)；¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ:195.8 (C-1), 45.4 (C-2), 56.5 (C-3), 196.3 (C-4), 138.2 (C-4a), 119.3 (C-5), 134.9 (C-6), 117.2 (C-7), 159.3(C-8), 124.3 (C-8a), 31.0 (C-1′),80.9 (C-2′), 75.9 (C-3′), 42.0 (C-4′), 19.2 (C-5′), 56.5 (8-OCH₃)。以上數據與文獻報道基本一致^[5]，故鑒定化合物2為elecanacin。

化合物3：黃色粉末（甲醇）。ESI-MS m/z:327 [M＋Na]⁺。¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 7.80 (1H, d, J = 7.8Hz, H-5), 7.72 (1H, t, J = 7.8 Hz, H-6),7.26 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-7), 5.20 (1H,m, H-2′), 1.28 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-5′),1.96 (3H, s, 2′-OCOCH₃), 4.04 (3H, s, 8-OCH₃)；¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ:179.6 (C-1), 154.6 (C-2), 117.6 (C-3), 184.2 (C-4), 135.0 (C-4a), 119.9 (C-5), 136.6 (C-6), 116.8 (C-7),160.2 (C-8), 116.9 (C-8a), 29.6(C-1′), 69.6 (C-2′), 20.1 (C-3′), 21.4 (2′-OCOCH₃), 170.7 (2′-OCOCH₃),56.6 (8-OCH₃)。以上數據與文獻報道基本一致^[10]，故鑒定化合物3為3-[2-(acetyloxy) propyl]-2- hydroxy-8-methoxy-1,4-naphthoquinone。

化合物4：黃色粉末（甲醇）。ESI-MS m/z:267 [M＋Na]⁺。¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 7.76 (1H, d, J = 7.8Hz, H-5), 7.71 (1H, t, J = 7.8 Hz, H-6),7.32 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-7), 2.49 (3H,s, H-2′), 2.06 (3H, s, H-3′)；¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ:182.8 (C-1), 139.9 (C-2), 147.3 (C-3), 185.5 (C-4), 139.9 (C-4a), 119.5 (C-5), 135.4 (C-6), 118.0 (C-7), 159.6(C-8), 119.0 (C-8a), 202.1 (C-1′),31.7 (C-2′), 12.7 (C-3′), 56.5 (8-OCH₃)。以上數據與文獻報道基本一致^[12]，故鑒定化合物4為2-acetyl-8-methoxy-3-methylnaphthoquinone。

化合物5：黃色粉末（甲醇）。ESI-MS m/z:281 [M＋Na]⁺。¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 6.95 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-1), 6.45 (1H, d, J= 1.8 Hz, H-6), 6.53 (1H, d, J = 1.8Hz, H-8), 4.86 (1H, m, H-4′), 2.66 (3H, s, H-1′), 1.65 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-5′)；¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ:122.5 (C-1), 139.8 (C-2), 107.7 (C-3), 162.0 (C-4), 113.2 (C-4a), 157.7 (C-5), 101.8 (C-6), 158.9 (C-7), 101.4(C-8), 136.8 (C-8a), 20.9 (C-1′),191.5 (C-2′), 45.4 (C-3′), 76.5 (C-4′), 23.2 (C-5′)。以上數據與文獻報道基本一致^[13]，故鑒定化合物5為二羥基艾榴醇。

4? 抗菌實驗

針對紅蔥提取物的藥理活性報道，對所得的5個化合物進行抗金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus（ATCC6538）和大腸桿菌Escherichia coli（ATCC25922）活性篩選，左氧氟沙星作為陽性對照。

金黃色葡萄球菌和大腸桿菌分別接種于培養基上，37 ℃培養24 h后，從平板中刮取菌落，以無菌生理鹽水稀釋，用麥氏比濁管測細菌濃度，配制成9×10⁶ CFU/mL細菌稀釋液，從各種細菌稀釋管中分別取0.05 mL菌液，點種于各濃度藥物平板及不含藥物的對照平板上，37 ℃培養24 h后觀察并記錄化合物及陽性藥的MIC值，實驗重復3次，結果見表2。

上述結果表明，紅蔥提取物中所含的萘酚或醌類均有一定程度抑制金黃色葡萄球菌和大腸桿菌生長的功效，其中化合物5的抑制效果最為顯著，對2種細菌的MIC值最低，分別為0.30、0.06 μg/mL。