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Chem. Eur. J. :單細胞ICP-qMS多參數分析:甲烷驅動的離子云拉伸策略2025-02-25
細胞是生命活動的基本單元。就像我們每個人都不同一樣,細胞間也存在異質性。分析不同種類細胞和同類細胞間單細胞的個性和行為差異,不僅可以對細胞進行分類,而且可以理解正常細胞和病變細胞的生理特性,進而為疾病診斷提供可靠信息并制定有效的后續治療方案。因而,單細胞分析是當前非常活躍的研究領域。因為核酸分子可通過聚合酶鏈式反應進行放大的特性,單細胞分析大多通過其中核酸的分析來實現。但是,我們都知道,因所檢測到的核酸序列并不都能表達為相應的蛋白質分子,加之所表達的蛋白質分子必須經過復雜的翻譯后修飾加工才能發揮其功能,通過核酸分析來表征單細胞的特性和功能有時存在著不確定性;聚焦于單細胞行為和功能的主要執行者蛋白質進行單細胞分析將更為客觀。

典型硬電離源(如,電感耦合等離子體Inductively Coupled Plasma,ICP)四級桿(Quadrupole, q)質譜(ICP-qMS)最擅長于元素分析。在ICP中,所有分子甚至細胞都最終轉化為“原子離子”,再經qMS檢測。這意味著完整細胞不需經傳統的消解或酶解步驟即可進行分析。廈門大學王秋泉課題組利用前期自主研發的無油微流控芯片(Oil-Free Microfluidic Chip, OFMC)進行細胞分選列隊,并針對單細胞表面所表達的特征蛋白標志分子(EGFR, EpCAM, HER2和ERa),利用鑭系元素編碼的噬菌體MS2衣殼蛋白納米顆粒-抗體(Ln-MS2-antibody)進行標記和質譜信號放大,在ICP-qMS所配備的“碰撞反應池”(Collision Reaction Cell, CRC)中注入CH4碰撞氣體,發展將已在ICP中離子化的單細胞離子云“拉伸策略”(> 7,000 ms)(圖1a),使qMS有足夠的時間來順序掃描并檢測多個標記在細胞表面所表達的特征蛋白標志分子上的鑭系元素離子信號,實現了ICP-(CH4-CRC)-qMS單細胞多參數分析和四種典型的乳腺癌細胞(BT-474, SKBR-3, MDA-MB-231和MCF-7)的分型(圖1b)。

 

 

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圖1. ICP-(CH4-CRC)-qMS單細胞多參數分析平臺.

在所建立的ICP-(CH4-CRC)-qMS上,目前可以實現單細胞表面四種典型生物標志分子的同時分析,基本滿足臨床體外診斷(in-vitro diagnosis, IVD)要求;相比于使用大型飛行時間流式質譜(CyTOF),具有低成本高效的特點。展望未來,1)除了目前使用的CH4,期待發現更為高效的碰撞氣體將單細胞離子云的停留時間進一步拉長;2)相比于目前使用的Ln-MS2-antibody,設計制備更高質譜信號放大能力的元素標簽,進一步彌補因離子云拉伸而帶來的靈敏度損失;以及3)依賴于ICP-qMS儀器的升級,進一步降低四級桿在切換掃描不同質量時的死時間(settling time),有助于單細胞表面更多種類蛋白標志分子的分析。

文信息

A CH4-Driven Ion Cloud-Stretched Approach Enables ICP-qMS for Multiplex Single-Cell Analysis

Zhengxian Lv,?Xinli Yan,?Zhen Liu,?Shi Chen,?Xiaowen Yan,?Limin Yang,?Qiuquan Wang

Chemistry – A European Journal

DOI: 10.1002/chem.202402289

 

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