第一作者: ?Min?Yang
通訊作者: ?許文濤,?朱龍佼
通訊單位: ?中國農業大學?
研究內容：
CircRNA是一組環狀的、封閉的、單鏈的非編碼RNA，是癌癥診斷和預后的重要的生物標志物。對環狀RNA的敏感性和選擇性檢測可以大大促進人類疾病早期診斷的發展。作者提出了一種基于雙催化發夾自組裝?(CHA)和變色龍DNA模板銀納米團簇?(DNA-Ag?NCs)的無標記比的等溫擴增系統CircRNA的度量檢測。結果表明，上游的CHA1可以被分析物特異性觸發形成雙鏈DNA (dsDNA)，發夾DNA-Ag?NCs的紅色熒光降低破壞發夾結構。通過觸發序列，可以進一步激活下游的CHA2，生成另一個dsDNA復合物，從而導致綠色熒光的急劇增加。因此，通過測量綠色和紅色熒光強度的比值的明顯變化，比值系統可以靈敏地檢測和視覺區分環狀體核糖核酸。此外，在CHA周期中的兩階段信號擴增使該檢測方法具有超高靈敏度的檢測性能，其中對RNA靶標的檢測限為1pM。此外，該新方法可作為分析不同類型的環狀RNA的通用策略，從而顯示出其在檢測豐富的生物標志物方面的巨大潛力。?
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?示意圖1
要點一：
成功構建了基于CHA調制的放大傳感器系統，用于Circ-MAT2B的比值檢測。該系統已顯示成功地實現了同步信號的產生、放大和切換，提高了反應效率。
要點二：
該方法所涉及的CHA9反應發揮了三個重要作用：第一，雙CHA反應實現了熒光信號的雙重放大；第二，自組裝核酸誘導的構象變化，導致DNA-Ag?NCs的熒光發射發生變化；第三，當兩個發夾形成dsDNA時，Ag?NCs熒光增強。
圖1：(A) DNA-Ag?NCs中熒光變化的形成和過程示意圖；(B)H1-Ag?NCs和(C)H3-Ag?NCs的HR-TEM圖像；(D)天然PAGE分析結果；(E)(a)H1-Ag?NCs、(b) TDNA+H1-Ag?NCs+H2、(c)H3-Ag?NCs和(d)TDNA+H1-AgN?Cs+H2+H3-Ag?NCs+H4的熒光光譜；(F-I)在不同濃度的TDNA存在下，系統的二/三維熒光激發發射圖。
圖2：(A)不同濃度TDNA存在時系統的熒光變化；(B)熒光強度(F560/F610)與TDNA濃度的對數的比值；(C)對目標TDNA分析系統的選擇性。
圖3：(A)在不同濃度的TRNA存在下，擴展通用檢測系統的熒光變化；(B)熒光強度(F560/F610)與TRNA濃度的對數的比值；(C)擴展通用系統分析目標TRNA的選擇性。
圖4：(A)檢測不同數量的HepG2細胞總RNA中的Circ-MAT2B；(B)檢測HepG2和L02細胞裂解液中的Circ-MAT2B的檢測。
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參考文獻
Min Yang, Hongyu Li, Xiangyang Li, Kunlun Huang, Wentao Xu, Longjiao Zhu, Catalytic hairpin self-assembly regulated chameleon silver nanoclusters for the?ratiometric detection of CircRNA,?Biosensors?and Bioelectronics?(2022), doi: https://doi.org/10.1016/j.bios.2022.114258.
